Нестабилност пептида је један од главних проблема у истраживању њихове формулације, а за то постоји много разлога. Али нема много главних разлога за нестабилност одређеног пептида. Детаљна студија утицаја спољашњих услова (као што су пХ, температура, светлост, концентрација кисеоника, итд.) на стабилност пептида може помоћи у дизајнирању рационалне формулације. Иако механизам којим адитиви стабилизују пептиде још увек није у потпуности схваћен, употреба адитива је и даље једно од главних средстава за побољшање стабилности пептидних формулација. Примена аналитичких метода као што су ЦД и ДСЦ може помоћи да се брзо прегледа одговарајући адитиви.
Разлози за нестабилност пептида:
Реакција деамидације: У реакцији деацетилације, остаци Асн/Глн се хидролизују да би се формирао Асп/Глу. Изводи се неензимска реакција деамидације. Амидне групе у Асн Гли структури се лакше хидролизују, а амидне групе које се налазе на површини молекула се такође лакше хидролизују од оних унутар молекула.
Постоје два главна разлога зашто су раствори пептида склони оксидацији: један је контаминација пероксида у раствору, а други је спонтана оксидација пептида. Од свих аминокиселинских остатака, најлакше се оксидирају Мет, Цис, Хис, Трп, Тир итд. Парцијални притисак кисеоника, температура и пуферски раствор такође имају утицај на оксидацију.
Хидролиза: Пептидне везе у пептидима се лако хидролизују и разбијају. Пептидне везе које формира Асп лакше се разбијају од других пептидних веза, посебно Асп Про и Асп Гли пептидних веза.
Формирање погрешних дисулфидних веза: Размена између дисулфидних веза или између дисулфидних веза и тиолних група може да формира нетачне дисулфидне везе, што доводи до промена у терцијарној структури и губитка активности.
Рацемизација: Осим Гли, алфа атоми угљеника свих аминокиселинских остатака су хирални и лако пролазе кроз реакције рацемизације под алкалном катализом. Међу њима, Асп остаци су најсклонији реакцијама рацемизације.
- елиминација: - елиминација се односи на елиминацију функционалних група на - атому угљеника у амино киселинским остацима. Цис, Сер, Тхр, Пхе, Тир и други остаци се могу разградити - елиминацијом. - елиминација је склона да се јавља при алкалном пХ, а температура и јони метала такође имају утицај на њу.
Денатурација, адсорпција, агрегација или преципитација су генерално повезани са уништавањем терцијалних и секундарних структура. У денатурисаном стању, пептиди су често склонији хемијским реакцијама и њихову активност је тешко опоравити. У процесу денатурације пептида прво се формирају интермедијери. Растворљивост међупроизвода је обично ниска, што их чини лаким за агрегацију и формирање агрегата, који заузврат формирају видљиве преципитате голим оком.
Површинска адсорпција протеина је још један проблем главобоље који се јавља током њиховог складиштења и употребе, као што је адсорбовање риЛ-2 на површини цевовода током Ку перфузије, што доводи до губитка активности.