-
Telefon
+86-0755 2308 4243
-
Adresa
Соба 309, зграда Меихуа, индустријски парк Тајвана, бр. 2132 Сонгбаи Роад, округ Бао'ан, Шенџен, Кина
-
E-pošta
ФАК
Које методологије синтезе Биорунстар користи за синтезу пептида?
РЕ: Биорунстар је развио различите методологије синтезе фазе решења како би задовољио захтеве купаца. Обично се примењује чврста фаза Фмоц хемије.
Како шаљете пептиде? Који КЦ подаци ће бити обезбеђени?
РЕ: Сви пептиди ће бити испоручени ДХЛ-ом или ФедЕк екпрессом као у лиофилизованом праху у појединачним добро обележеним бочицама, на собној температури. Са изузетком сирових пептида, који ће бити проверени само МАЛДИ-МАСС спектрометријом, сви синтетички пречишћени пептиди долазе са извештајем о пројекту (ЦоА), МС подацима и ХПЛЦ подацима. биће обезбеђени листови са подацима који садрже кључне карактеристике, као што су секвенца пептида, чистоћа, количина, модификација, подаци масеног спектра и ХПЛЦ подаци.
Које је типично време преокрета за синтезу пептида? Колико је потребно да ми се пошаље?
РЕ: Наше типично време обраде је 2-3 недеља за стандардни пептид испод 30 аминокиселина. Време преокрета варира у зависности од дужине пептида, количине, растворљивости и тежине. Обично 3-5 дана да дођете до истраживача у другим земљама.
Колико дуго можете да синтетишете?
РЕ: Биорунстар има велико искуство у синтези дугих пептида, до 130аа. За разлику од многих добављача пептида којима је удобно само да праве пептиде испод 30 или 40аа, Биорунстар има добро искуство у прављењу пептида у распону од 40аа до 90аа. Тешко је синтетизовати дугачке пептиде, посебно 100аа или дуже. Ако планирате да синтетишете секвенцу од 130аа или дуже, контактирајте нас за прилагођену експресију протеина и услугу пречишћавања.
Шта ако се појаве неки проблеми током процеса синтезе или пречишћавања?
РЕ: Сваки пептид има своје специфичне карактеристике. Ако се током синтезе десе неки проблеми изнад наших очекивања, а не можемо да испоручимо ваш пептид на време, обавестићемо вас што је пре могуће. Игром случаја, ми нисмо у могућности да направимо пептид, неће вам бити наплаћени никакви трошкови.
Облик ТФА соли, ацетат или ХЦл облик соли: Који облик да изаберем?
Подразумевано, пептиди се синтетишу у ТФА соли. За експерименте у вези са ћелијском или ткивном културом, требало би да размотрите производњу пептида у облику ацетата или ХЦл соли на 98% или више да бисте избегли абнормалне реакције. Форма ацетата или ХЦл соли може се затражити уз додатну цену.
Колики је рок трајања пептида?
РЕ: Пептиди су стабилни најмање годину дана ако се чувају лиофилизовани у замрзивачу. Ако се пептиди растворе, рок трајања се може смањити. Ако пептиди садрже неколико реактивних аминокиселина које се могу оксидовати као Трп, Мет, али посебно Цис, рок трајања се такође може смањити.
Пептид садржи неколико цистеина и стога може лако да формира дисулфидне везе. Како да избегнем ово?
РЕ: Ако пептидна секвенца садржи неколико цистеина, или других реактивних аминокиселина, које се лако оксидују, Биорунстар нуди испоруку пептида са траговима јаког редуктанта ДТТ. Пептид се испоручује са ДТТ само ако је то изричито дозвољено од стране купца.
Како да чувам своје синтетичке пептиде?
РЕ: Већина лиофилизованих пептида ће бити стабилна на собној температури током 2-3 недеља. За дуготрајно складиштење, требало би да чувате лиофилизоване пептиде на -20 степену. Треба избегавати поновљене циклусе замрзавања-одмрзавања. Оставите да дође до собне температуре пре отварања. Рок употребе пептидних раствора је ограничен; једном припремљени раствор пептида треба употребити што је пре могуће.
Која је чистоћа сировог пептида и осољеног пептида? Како пречистити пептид? Које су нечистоће?
РЕ: За кратке пептиде са нормалним секвенцама испод 15аа, генерално је 40-60% према ХПЛЦ за сирови квалитет; 50-70% према ХПЛЦ-у за осољени степен. Што је пептид дужи, то је нижа чистоћа сировог или десољеног. Пептиди се генерално пречишћавају помоћу ХПЛЦ користећи градијент воде и ацетонитрила. Већина нечистоћа су фрагменти или делециони пептиди, непотпуно уклоњени пептиди и заостала со и вода.
Објашњење чистоће пептида помоћу ХПЛЦ, укупног садржаја пептида и циљаног садржаја пептида.
РЕ: Биорунстар испоручује пептиде према бруто тежини лиофилизованог праха. Лиофилизовани прах укључује нечистоће као што су фрагменти или делециони пептиди, непотпуно уклоњени пептиди, ТФА и заостала вода. Чистоћа пептида се мери помоћу ХПЛЦ. То је количина исправног пептида у односу на све аналите који апсорбују на ~214 нм (пептидна веза апсорбује), највероватније делеција, скраћење или непотпуно уклоњена заштита, итд. Чистоћа пептида према ХПЛЦ не узима у обзир воду и соли који су обично присутни у узорку. Укупни садржај пептида је проценат укупних присутних пептида у односу на све што је присутно у лиофилизованом пептидном праху. Укупни садржај пептида се одређује анализом садржаја азота. Циљни садржај пептида у лиофилизованом пептидном праху се стога може закључити формулом: Укупан садржај пептида Кс Чистоћа пептида помоћу ХПЛЦ.
Који је метод обележавања флуоресцеином?
РЕ: ФИТЦ (флуоресцеин изотиоцијанат) је активирани прекурсор који се користи за обележавање флуоресцеином. За ефикасно обележавање Н-краја, аминохексаноил са седам атома
одстојник (НХ{{0}ЦХ{{1}ЦХ2-ЦХ2-ЦХ2-ЦХ2-ЦООХ) је уметнут између флуорофора (флуоросцеина) и Н-терминус пептида. Овај одстојник помаже да се одвоји флуорофор од његове тачке везивања, потенцијално смањујући интеракцију флуорофора са биомолекулом на који је коњугован и чинећи га доступнијим за секундарне реагенсе за детекцију.
одстојник (НХ{{0}ЦХ{{1}ЦХ2-ЦХ2-ЦХ2-ЦХ2-ЦООХ) је уметнут између флуорофора (флуоросцеина) и Н-терминус пептида. Овај одстојник помаже да се одвоји флуорофор од његове тачке везивања, потенцијално смањујући интеракцију флуорофора са биомолекулом на који је коњугован и чинећи га доступнијим за секундарне реагенсе за детекцију.
Да ли је могуће обележавање биотина (или ФИТЦ) на Ц-терминалу?
РЕ: Да. Обележавање Ц-терминала биотина (или ФИТЦ) се врши додавањем остатка лизина на Ц-терминусу пептида, а биотин (или ФИТЦ) је везан за бочни ланац лизина преко амидне везе. Позитивно наелектрисање лизина је уклоњено.
Која је одговарајућа дужина пептида за производњу антитела?
РЕ: Генерално, препоручује се 10-25 остатак пептида. Дужи пептид би могао имати више епитопа, али би такође могао имати веће шансе да формира стабилне секундарне структуре које нису природни облици. Краћи пептид (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Шта је МАП?
РЕ: МАПС или мулти-антигени пептид је разгранати пептид на коме су линеарни пептидни ланци повезани на свом Ц-крају преко полилизинског језгра, чиме се повећава величина целог молекула. Ово се ради да би се елиминисало спајање пептида са КЛХ. Чини се да је, међутим, конформација пептида на МАП-у мање флексибилна, а антитела добијена МАП-ом типично препознају циљни протеин ређе него конвенционалном КЛХ коњугацијом. Поред тога, нема слободног пептида који се производи приликом прављења МАПС-а, што отежава уклањање антитела усмерених на полилизинско језгро. Пречишћавање МАПС ХПЛЦ-ом је тешко, а МАПС се обезбеђује без верификације масе због његове хетерогености и велике величине молекула.
Зашто је мој раствор пептида коњугованог са КЛХ замућен?
РЕ: КЛХ или хемоцијанин Кеихоле Лимпет је велики агрегирајући протеин (МВ=4к105 – 1к107). Због своје величине и структуре, његова растворљивост у води је ограничена, што узрокује замућен изглед. Ово неће утицати на имуногеност и замућени раствор се може користити за имунизацију.
Можете ли објаснити М+На и М+К масене врхове у МАЛДИ спектрима?
РЕ: Веома је уобичајено видети адукте На (натријум) и К (калијум) у МАЛДИ спектру. Натријум и калијум потичу из воде која се користи у пептидним растварачима. Чак и дестилована и дејонизована вода има трагове натријумових и калијумових јона, који се никада не могу у потпуности уклонити. Оне постају јонизујуће током МАЛДИ масеног спектра и везују се за слободне карбоксилне групе пептида. Пошто не постоји систем за пречишћавање воде који ће уклонити сваки појединачни јон натријума или калијума из воде, уочавање адукта натријума и калијума повремено је врло уобичајено и неизбежно у МАЛДИ масеним спецификацијама. Ово није показатељ да пептид није чист, нити га треба мешати са нетачном молекулском тежином.