Шта је синтеза пептида

 

Синтеза пептида је активно поље у хемији протеина и пептида, које обично укључује секвенцијално додавање аминокиселина у дефинисаном редоследу да би се формирао пептидни ланац хемијским методама. Главне методе синтезе су синтеза у течној и чврстој фази. У поређењу са ЛППС, СППС има предности што је бржи, једноставнији, са мање нежељених реакција и већи принос.

 

Стандардна СППС метода, укључујући Боц (бензил) и Фмоц (тБу) стратегије.

 

 

Боц (бензил) стратегија

У овом приступу синтезе, хлорометиловани, хидроксиметиловани полистирен и п-метоксибензил (ПМА) смоле се користе као чврсти носачи. -амино група је заштићена т-бутоксикарбонилом (Боц), док су групе бочних ланаца аминокиселина заштићене бензил дериватима. Боц група се уклања коришћењем чисте ТФА или ТФА у ЦХ2Цл2, а на крају синтезе, заштитне групе бочног ланца и везе пептид-смола се уклањају јаком киселином попут анхидроване флуороводоничне киселине (ХФ) или ТФМСА.

 

Фмоц (тБу) стратегија

У овом приступу синтезе, Ванг-смола, 2-хлоротритил хлорид смола, Ринк амид-АМ смола, Ринк амид-МБХА смоле се користе као чврсти носачи. -амино група је заштићена са 9-флуоренилметоксикарбонилом (Фмоц ), док су групе бочних ланаца аминокиселина заштићене заштитним групама лабилним на киселину. Фмоц група се уклања коришћењем 20% пиперидина у ДМФ-у, а на крају синтезе, заштитне групе бочног ланца и везе пептид-смола се уклањају са 1%-95% ТФА. Фмоц СППС је тренутно пожељна метода за синтезу пептида.

 

Основни принципи Фмоц синтезе пептида у чврстој фази

 

Изаберите Ресин

Најшире примењене смоле у ​​Фмоц СППС укључујући 4-алкоксибензил алкохол (Ванг) смолу, 2-хлоротритил хлорид смолу, Ринк амид смолу, Ринк амид-МБХА смолу. Амидне смоле се користе за синтезу пептида са потребном Ц терминалном амидацијом. Ванг смола и 2-Цл Трт смола се обично користе за синтезу пептида са потребним ЦООХ без Ц терминала. Али када Ц-терминус пептида има Про и Гли као прву аминокиселину, Ванг смолу не треба користити због ризика од формирања ДКП (дикетопиперазина), 2-Цхлоротритил Цхлориде Ресин се препоручује за употребу.

 

 

Причвршћивање заштићених аминокиселина на смоле

Прва Фмоц аминокиселина је везана за нерастворну смолу носача преко киселинско лабилног линкера.

 

Уклањање заштите -амино заштитне групе

Привремена Фмоц заштитна група на Н-терминусу пептидил-смоле се уклања третирањем са раствором 20% пиперидина у ДМФ. Ова реакција се обично завршава у року од 10 до 20 минута.

 

Кораци за прање

После сваке хемијске реакције, изводе се кораци испирања како би се уклонио вишак реагенса, нуспроизвода и неизреагованих молекула из смоле. Ово помаже у одржавању чистоће растућег пептидног ланца.

 

Активација и спајање заштићене аминокиселине

Заштићена амино киселина везана за смолу се активира да би се побољшала њена реактивност за купловање са следећом амино киселином у низу. Уобичајени агенси за активирање укључују ХОАт, ХОБт, ПиБОП, ПиАОП, ХБТУ и ХАТУ. Спајање укључује формирање пептидне везе између активиране амино киселине и амино групе растућег пептидног ланца. Кајзеров тест се обично користи за праћење комплетности реакција купловања.

 

Кораци за прање

Слично ранијим корацима испирања, ово осигурава уклањање вишка реагенса и нуспроизвода након реакције спајања.

 

Одвајање од смоле и уклањање заштите заштитних група бочног ланца

Када се жељена пептидна секвенца синтетише на смоли, она се одваја од чврстог носача коришћењем коктела за цепање као што је трифлуоросирћетна киселина (ТФА) који садржи чистаче попут тиоанизола и воде. Истовремено, заштитне групе бочног ланца на остацима аминокиселина се уклањају, откривајући потпуно уклоњени пептид спреман за пречишћавање и анализу.